除非另有說(shuō)明，反相柱應始終使用至少 5% 的有機改性劑。在 95% 到 100% 的水溶液條件下，色譜柱可能會(huì )發(fā)生去濕/相塌陷，這意味著(zhù)流動(dòng)相會(huì )由于表面張力而從多孔系統中排出。該問(wèn)題通常發(fā)生在流停止時(shí)。如果色譜柱已去濕，則可以通過(guò)泵送 10 到 20 個(gè)柱體積的純甲醇/乙腈或含有至少 50%  有機改性劑的流動(dòng)相來(lái)恢復它，但不能保證它會(huì )起作用。這種現象在 C18 和 C8 色譜柱中極為常見(jiàn)，其他反相色譜柱也應避免這種現象，以確保色譜的穩定性。

事實(shí)上，C8 和 C18 鏈形成了一個(gè)非常疏水的層，所以當流動(dòng)相的有機含量低于 5% 時(shí)，它的表面張力會(huì )增加到流動(dòng)相不能再潤濕孔隙內部的程度，并且顯然表現為分析物保留的可逆損失。 具有低碳載量（ 反相 HPLC 色譜柱 C6、C4、苯基、PFP 等另一方面）始終能夠耐受較低濃度的有機物而不會(huì )發(fā)生任何保留偏移。

由于傳統的 C18 HPLC 色譜柱在這些高含水條件下表現不佳，現在市場(chǎng)上有一類(lèi)新型 RP-AQ 固定相，在這些惡劣條件下表現出不變的性能。它們的多功能性證明它們是常規 HPLC 分析以及 100% 水溶液條件下極性樣品分析的理想選擇。