高效液相色譜系統的有效運行取決于流動(dòng)相和樣品不受化學(xué)雜質(zhì)或固體懸浮液的影響。HPLC流動(dòng)相處理和使用中的注意事項討論了流動(dòng)相制備和使用過(guò)程中應采取的措施。樣品過(guò)濾的重要性討論了清潔樣品進(jìn)樣的好處。

高效液相色譜柱是高效液相色譜系統的關(guān)鍵部件，需要小心處理和保護。經(jīng)常更換色譜柱是很昂貴的，因此您的目標應該是*大限度地延長(cháng)色譜柱的使用壽命，以便每次都能獲得所需的準確度和一致性結果。

由于雜質(zhì)和懸浮液的逐漸累積，HPLC柱的色譜行為在使用過(guò)程中開(kāi)始下降。流動(dòng)相或樣品中大于2μm的顆粒開(kāi)始沉積在柱的入口玻璃料上，從而干擾流動(dòng)的均勻性。較小的顆粒會(huì )導致背壓增加，因此它們開(kāi)始阻塞固定相的流動(dòng)路徑。

污染物的性質(zhì)

·反相分離中高度保留的化合物，如脂肪酸
·不可逆保留的化合物，如殘留的蛋白質(zhì)，在樣品提取時(shí)未完·全去除。強烈建議在HPLC分析之前對生物液體中的蛋白質(zhì)進(jìn)行脫蛋白處理。
·顆粒雜質(zhì)可能是由于樣品未過(guò)濾，系統部件（如泵或噴油器中的密封件）磨損而釋放的顆粒。

·柱內殘留緩沖液干燥產(chǎn)生的結晶沉積物。使用后用HPLC級水或緩沖溶液清洗色譜柱可防止此類(lèi)鹽沉積的形成。

什么是保護柱？

保護柱是安裝在進(jìn)樣器和分析柱之間的保護柱或小柱。 它用于去除到達分析柱的雜質(zhì)和懸浮固體。 通常它具有大約 2 厘米的長(cháng)度和 4.6 毫米的內徑。 保護柱填充有約 40 μm 大小的片狀顆粒，壓降可忽略不計。

護柱的理想特性

·保護柱最好具有與分析柱相同的填料，以消除分離并發(fā)癥
·護柱的內部ID應與分析柱相當，以將背壓降至最·低。較短的保護柱長(cháng)度是可取的，但其長(cháng)度應足以防止強烈保留的化合物到達主柱
·面向注入器的熔塊應可移除，以便通過(guò)移除約2 mm的材料并填充新材料進(jìn)行清潔
·與可重新填充的防護柱相比，一次性盒式防護柱使用方便且經(jīng)濟。

需要定期更換保護柱，但通過(guò)觀(guān)察色譜行為的變化，如背壓增加、峰加寬和峰保留時(shí)間的變化，需要進(jìn)行中間更換。然而，變化頻率可根據樣品的化學(xué)成分、高保留或不可逆保留成分的存在、進(jìn)樣量或進(jìn)樣次數來(lái)確定。